Более подробно

В начале своего проекта мы изучили такие понятия, как репликация, репарация, транскрипция, трансляция и другие. Далее мы собрали пробы с различных предметов общего пользования.Следующим шагом стало выделение НК (нуклеиновой кислоты) из собранного материала: мы добавили биологический материал в лизирующий раствор (этот раствор обеспечивает лизис биоматериала, растворение клеточных и вирусных частиц и высвобождение НК), затем несколько раз добавляли промывочный раствор (он удаляет остатки лизирующего раствора и компоненты биологического материала), а после центрифугировали пробирки и забирали надосадочную жидкость.

В некоторых случаях с РНК-вирусами мы также проводили обратную транскрипцию. Сначала готовили от-смесь: от-буфер + праймер + обратная транскриптаза, затем смешивали от-смесь с образцом НК, встряхивали на вортексе, далее мы поместили пробирки в термостат и инкубировали. В конце осадили капли, добавили буфер и встряхнули пробирки на вортексе.

Последним шагом для нахождения патогенов стало проведение ПЦР (полимеразной цепной реакции). Для этого мы приготовили смесь из ПЦР-буфера и Taq- полимеразы, добавили минеральное масло и выделенную ДНК в готовые эппендорфы с раствором праймеров и днк-зондов. После этого центрифугировали и установили пробы в амплификатор.

Наша команда соблюла все температурные режимы ПЦР: денатурация (расцепление цепи ДНК), отжиг (присоединение праймера), элонгация (присоединение нуклеотидов к цепям). Компьютер показал нам результат на наличие патогенов (с помощью флуоресцентных зондов, флуоресценция которых увеличивается при накоплении продукта с каждым новым циклов)